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羥丁酸脫氫酶—9028-38-0

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中文：羥丁酸脫氫酶

英文：β-HBDH

CAS：9028-38-0

分子式：C5H6ClN3

純度：≥90%

中文同義詞：β-羥丁酸脫氫酶; Beta-羥丁酸脫氫酶; D-3-羥丁酸脫氫酶;

英文同義詞：β-HBDH, EC1.1.1.30; (R)-3-Hydroxybutanoate: NAD+ oxidoreductase;

技術(shù)指標(biāo)

外觀: 白色無定型凍干粉末;蛋白純度: ≥90%; 比活性:≥300 U/mg 酶粉;蘋果酸脫氫酶: ≤0.002%; 乳酸脫氫酶:≤0.002%; NADH 氧化酶: ≤0.002%

酶學(xué)性質(zhì)

來源：微生物;分類：EC 1.1.1.30; 分子量：27 kDa(SDS-PAGE); 等電點(diǎn)：6.1;Km值：1.46×10-2 M；(D-3-Hydroxybutyrate)，9.5×10-5 M(NAD+); 抑制劑：Hg2+，Ag+，SDS

最適pH：8.5;最適溫度：60℃; 用途:用于 β- 羥丁酸試劑的研發(fā)和大量配制。

酶活定義:單位酶活定義為在下述反應(yīng)條件下，每分鐘生成 1μmol NADH 所需的酶量。

試劑準(zhǔn)備

試劑I：100 mM pH 8.5 Tris-HCl 緩沖液。

試劑II：158 mM 3- 羥丁酸鈉溶液（用試劑I溶解）。

試劑III：27.9 mM NAD+（用試劑I溶解）。

試劑IV：100 mM Tris-HCl，pH 8.5，含0.1%BSA。

待測樣品：用試劑 IV 將酶液稀釋至 0.1-0.5U/mL。

操作步驟

1.在3 mL比色皿中加入 2.3 mL 試劑I，0.5mL 試劑II，0.2 mL試劑III，37℃ 預(yù)熱 5 min。

2.加入100μL待測樣品，混勻。

3.在340nm處37℃反應(yīng)，記錄1 min內(nèi)的吸光度變化（ΔAs）

*用酶稀釋液替代酶液，其它步驟相同，所得溶液吸光度為空白吸光度（ΔAb）ΔA=ΔAs-ΔAb